DNA碎片分析具体步骤是什么样子的？
2012-01-19 20:21:28   来源：   点击：

3 个答案

• 答案 1：

  就我知道的写一点补充吧。不确定提问者的“DNA碎片”指的是什么，不知道从哪里开始讲起。从犯罪现场收集来的各种DNA证据（血液，头发，精液等等大家都熟悉了）为的是能够从中提取足够多的DNA。根据能获得的DNA的量不同，可能会采取不同的分析方法。建立DNA-Profile的基础就是分析高度可变的重复序列，这种是在染色体上频繁出现的“可变数目的重复序列 (VNTRs)[1] “，或者是”短重复序列 (STRs) [2] ”（算是VNTPs的一种），这些序列在不同人的身上以不同长度的组合出现，近亲间会非常相似，但在无亲缘关系的人之间几乎不可能会相同。这就是鉴定的理论基础。过程就是提取细胞核DNA，通过聚合酶链式反应 (PCR)[3] 对STR部位的片段进行指数级的扩增，因为之后的电泳会将这些片段按大小分离开来，所以总量必须够大以保证分离之后得到的片段被检测到。电泳的原理 @米叔 已经讲了，记得在几年前一个讲座里听过现在鉴证科用的都是以毛细管电泳[4]为基础的仪器，就是可以在很细的导管里用高压使片段分子迅速分离，而且包括加萤光染料最后检测对比的过程都可以实现自动化。分离之后，通过同时比对多个STR位点，就会给出一个条带图谱，以及这样的图谱在整个种群中出现的几率，然后从统计学上给出一个带有相同图谱的人出现的可能性。基本上如果对比8到15个这样的位点，这个几率就是几百万分之一。也就是说两个没有亲缘关系的人几乎不可能会有相同的STR图谱。然后每个国家对建立和比对这种DNA-Profile都有不同的程序，在德国就是将取证得来的未知的DNA-Profile与已有罪犯及嫌疑人的数据库对比，不过结果本身似乎也不能作为是否有罪的直接证据。另外也有其它方法来对DNA证据进行分析，比方使用线粒体DNA。线粒体DNA简单来说就是一套除了我们通常所说的23对染色体基因组之外，存在于我们每个细胞的细胞器当中的独立的DNA。它的特点的拷贝数量大，所以在不能获得足够生物组织样本的情况下可以使用。据说世贸大楼灾难里面的很多受难者都是通过这个方法确认身份的。[1]en.wikipedia.org/wiki...[2]en.wikipedia.org/wiki...[3]en.wikipedia.org/wiki...[4] en.wikipedia.org/wiki...

• 答案 2：

  提问者是想知道仪器分析的步骤吗？还是只是想知道在做这件事的时候人都在干什么？我都简单讲讲吧。感谢邀请。基因结构和序列梯子不同的DNA有不同的分子尺寸，我不确定，印象中电泳法是一种比较成熟的可以根据分子的尺寸来分离这些分子的方法。一块玻璃板上涂上凝胶然后通低压直流电，DNA样本放在板子的负极上于是不同尺寸的分子就以不同的速度在凝胶上移动（可参考zhihu.com/question...）。分子是从负极向正极作直线运动的，于是样本并列在一起，十几个小时之后DNA碎片就分离了（这个时候人大概可以去喝喝咖啡睡睡觉什么的，没有条件亲手实验，不敢乱说）。接下来就要考虑去测定那些个体碎片的位置，一般的方法是把凝胶浸入到一种溶液里面去，这种溶液能把双股的DNA碎片分成单股（什么溶液没记住），之后压向一层塑料膜，单股碎片就被转移到那膜上面去了。我们知道DNA是含有A、T、C、G四种碱基，经过以上两步之后现在这些可爱的小家伙们已经在链上充分暴露，那么我们就可以使用探针来处理它们。一般这个过程被称之为“标记”。有一种探针是通过其他的途径获得的单股DNA小段，并被放射性原子所标记过，探针里面的碱在片断中找到它们的互补碱，然后再凑上去，和它们的“互补”混在一起。这一个步骤仍然是在膜上进行的，然后我们把膜清洗一下贴到X光胶片上，探针的放射性在胶片上产生一种映像，就是我们很熟悉的胶片上的一些像条码一样的点和带，每一条带代表着一个碎段。并排的条带，分子结构相同。说到高兴处，再说一点吧。”限制性片段长度多态性“简称”RFLP“，这是DNA的标准程序，在美国也被称之为“DNA分型”，产生的结果更容易被分析。这种分析方法是沿着股束检测一部分相同碱顺序的系列，被称为“同相重复序列可变数”，简称“VNTR”，这种神奇的技术被命名为“DNA指纹术”，它可以识别多重基因座的探针，分辨能力比单基因座方法强很多。但是RFLP的限制在于可供分析的样本可能会很小，于是又出现了“PCR”也就是“聚合酶链反应”这种技术，它能够做的事非常重要——复制。于是短时间内就可以产生成百上千个，直到检测人员拥有足够用来分析的股束了！我们在CSI里看到的一些仪器，就是这个了。____________由于同专业是相关的以前研究过，具体已经记不太清楚了，期待高人补充和解释。

• 答案 3：

  首先进行DNA提取，这部分的步骤与《CSI》中所演的不同，剧集中简化了。zh.wikipedia.org/wiki...接着把提取的DNA扔进全自动分析仪就行了，你什么都不用干，无人值守式的全自动，去喝杯咖啡，上会网，吃个饭，睡一觉，回来打印结果就行了，现在一般24小时内就能搞定。